Téchniques de laboratoire

Téchniques de laboratoire

Un des aspects fundamentaux à CERAM est l´investigation et mise à jour de diférentes téchniques qui peuvent être appliquées dans les traitements de procrèation assistée.

Cettes téchniques nous aident a meliorer les taux de réussite, bien qu´il est très important d´étudier chaque cas en detaills pour assurer une téchnique adéquate et nécessaire pour obtenir la grossesse.

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Vous trouverez ci-dessous l´information sur les téchniques que nous employons avec leur descritpion et quand est-elle recommandée. Si vous avez des doutes sur une des téchniques n´hésitez pas de nous contacter par téléphone, nous serons ravis de vous expliquer le déroulement de chaque traitement de fertilité.

ICSI

icsi fertilidad embarazoL’ICSI est une téchnique de reproduction assistée plus employée dans actualité- Vous la trouverez recommandée dans les traitements de fécondation in vitro, don d´embryons, don d´ovocytes ou don de sperme, puisque elle augmente les possibilités de la grossesse.

Les meilleurs spermatozoïds et ovocytes sont selectionnés dans le laboratoire et ils sont injectés un par un à l´interieur d´un ovocyte mur. Les embrions résultants sont placés dans l´uterus comme dans une FIV ou sont vitrifiés dans le cas d´embryons non transférés.

Quand est elle employee?

  • Quand le numéro des spermatozoïds est trés bas ou dans les cas de movilité ou motilité altéré
  • Dans les cas oú il faudra extraire avec chirurgie les spermatozoïds d´épididyme (PESA) ou du testicule (TESA)
  • Dans le cas de doute sur la fértilisation, par exemple, infertilité sans cause apparente
  • Dans les cas d´une mauvaise qualité ovocitaire ou quand il y´en a peu d´ovules
  • Si la femme est dans un âge reproductif avancée

Taux de grossesse avec ICSI

Au moment de parler du tax de grossesse il faut considérer les facteurs comme âge et le numéro d´embryons tranasférés. Le taux de la grossesse de fécondation in ivtro (FIV) avec la méthode de l´Injection intra- citoplasmique des spermatozoïds (ICSI) à CERAM est d´un 67%.

IMSI

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CERAM a été un de premiers centres à incorporer l´IMSI dans son laboratoire. La téchnique de fertilité IMSI (injection intra-citoplasmique des spermatozoïds selectionnés morphologiquement) peut augmenter de maniére sinificative le taux de grossesse.

Dans la téchnique IMSI, l´échantillon de spermatozoïds de l´homme est évalué a trevers d´un microscope qui augmente l´image des spermatozoïds jusq’au 6.000 fois plus (dans certains cas on l´augmente meme plus).

Ceci fait possible éliminer les spermatozoïds desquels noyaus ont une forme anormale et poor cette raison moins de probabilités de produire un embryon sain. Uniquement les spermatozoïds aves des ´´bonnes´´ caracteristiques génétiques sont selectionnés avec le microscope de l´IMSI. Ces spermatozoïds selectionnés sont fetilisés un par un dans les ovocytes à travers de la téchnique ICSI, en élevant encore un 15% le taux de la gorssesse.

Quand est elle employée?

  • Dans les cas de fausses couches répetées causés par le facteur spermatique
  • Si, en réalisant le test de sperme, on observe une qualité baisse des spermatozoïds et il est recommandé réaliser un sélection des spermatozoïds
  • Dans les cas des teratozoospermie ou spermatozoïds avec des anomalies morphologiques

MACS

À CERAM nous sommes des pionniers sur la Costa del Sol en employant la dernière téchnologie en procrèation medicalement assisstée qui permet clasifier et séparer magnétiquement les spermatozoïds.

La fragmentation du ADN est devenue, dans les derniéres années, un élément de base pour le diagnostic et une preuve fondamentale pour expliquer les causes de sterilité quand l´échantillon semble ´´normal´´ quant à la movilité et morphologie. Selon les diférentes études les causes de fragmentation sont liéés principalement à une cumulation des espéces oxidatives. Actuellement on investigue sur le traitement antioxidatif, bien que les résultats n´ont pas pour le moment l´efficacité désirée.

Cependant une téchnique a été développée afin d´éviter ce problème et augmenter les possibilités en selectionnant les spermatozoïds sains et viables pour le tratiement de ICSI/IMSI.

Réduction des spermatozoïds apoptotiques par MACS

L´apoptose est un processus biochimique lié au niveau biochimique élévé du ADN fragmenté. Annexine V détecte l´antigéne (phosfatidylsérine exteriorisé, EPS) qui est stocké dans le plasme de la membrane de cellules apoptotiques.

En marquant les spermatozoïds apoptotiques avec le solution mangétique de Annexin V et en utilisant la téchnique de clasification et séparation magnétique de celules activés (MACS) nous sommes capables de séparer les spermatozoïds avec apoptose de ceux qui sont sains.

La téchnique de clasification et séparation magnétique de celules activés (MACS) commence en marquant les celules apoptotiques a travers d´ún complexe magnétique de Annexin V. Les celules marquées passent par une colonne separatrice placés dans le champ magnétique. Les celules qui ne sont pas bonnes restent dans la colonne et les spermatozoïds vifs qui ne sont pas été marqués par la solution passent par la colonne et sont récueillis pour être utilisés dans le traitement. (Fig 1.)

Les spermatozoïds enrichis montrent en général une meilleure qualité quant à la morphologie, movilité, fragmentationdu ADN, apoptose, survie et le potentiel de fertilisation.

Quand est-elle utilisée?

Dans 20% de cas la sterilité est causée par le facteur masculin, néamoins contribue dans 30%-40% des facteurs mixtes diagnostiqués.

Quand il existe le facteur masculin de sterilité:

  • Diagnostiqué dans une analyse du sperme anomal ou irrégulier
  • Dans certains occasions autres facteurs masculins comme le numéro élevé des spermatozoïds avec la fragmentation du ADN

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BIOPSIE TESTICULAIRE

La biopsie testiculaire est menée chez les patiens où on ne trouve pas des spermatozoïds dans le sperme éjaculé, bien pour une pathologie, bien pour avoir fait une vasectomie précédemment. Elle consiste en extraire chirurgicalement les spermatozoïds directement du testicule. C´est une chirurgie ambulatoire et est menée avec anesthésie locale ou générale.

Il est important de souligner que l´échantillon prélevé peut etre congelé pour etre utilisé dans les cycles futurs, en evitant de cette manirère de répéter tout le processus de l´aspiration de l´épididyme ou de la biopsie testiculaire.

Ches qui est-elle recommandée la récuperation chirurgique de sperme?

Il y a certains groupes de patients chez lesquels il est recommandé la récupération chirurgique des spermatozoïds.

  • L´absence congénitale bilatérale des cannaux déférents
  • Obstruction de deux cannaux éjaculateurs
  • Azzospermie
  • Vasectomie

Comment est-elle réalisé la biopsie testiculaire?

Dans certains cas les spermatozoïds doivent etre prélevés chirurgiquement dans l´epididyme ou testicule à travers d´une des téchniques de récuperation des spermatozoïds (PESA, TESA), en dependant de la cause de son absence dans la sperme.

A CERAM nous réalisons deus traitements pour obtenir les spermatozoïds par une biopsie testiculaire:

  1. Aspiration percutanée des spermatozoïds d´epididyme (PESA)
    Ce processus est court et relativement indolore. Une aguille fine est insertée a travers du scrotum dans l´epididyme – on obtient le liquide par une aspiration délicate. Ce liquide est analisé dans le laboratoire quant au contenu et qualité de sperme.
  1. Extraction testiculaire des spermatozoïds (TESA)
    C´est un prélevement des spermatozoïds à partir d´une ou plusieures biopsies du tissu testiculair en réalisant après une petite incision dans la peau du scrotum.

DGP

Le diagnostic genetic pre-implantatoire ou DGO est une technique qui consiste en obtenir les embryons à travers fecondation en vitro, et un fois obtenue le stade de 8 celules, extraire 1 ou 2 celules pour les analyser avec les technices genetiques moléculaires.

Dans ce diagnostic nous choisissons les embryons normales pour la maladie analysée et ne présentent pas anomalies cromosomiques ou mutations genetiques.

Quand est il recommandé?

  • Chez les patients avec le risque de transmettre les maladies genetiques à leur enfants
  • Chez les femmes de plus de 38 ans, chez lesquelles il existe une augmentation de risque pour les grossesses avec les anomalies chromosomiques
  • Dans les cas de fausses couches spontanées répetés sans une raison concrète
  • Chez les couples qui ont soufert les échecs répétés dans les traitements de FIV, ICSI pour motifs inexplicables. De cette manière, il est possible augmenter notablement les possibilités de grossess dans cettes couples

CULTURE A BLASTOCISTE

Cette technique est utilisée habituelement dans procréation assistée autant dans les traitements de FIV comme dans ICSI et consiste en prolonger la culture des embryons dans le laboratoire jusqu´au le cinquième ou sixième jour et, de comme ca, de selectionner même les meilleurs embryons pour le transfert.

S´il y a le numéro suffisant d´embryons après la fécondation.

Quand est-elle recommandée?

  • Dans les cas d´échecs d´implantations précedents
  • Quand il existe un numero suficiente d’embryons après la fecondation

HATCHING ASSISTÉ

Le hatching assisté ou éclosion assisté est une téchnique qui consiste en réaliser un petit orifice dans la zone pellucide (la capsule qui protege et entoure l´embryon) avec l´intention de favoriser sa sortie et l´implantation dans l´utérus.

Quand sont – ils conseillées la culture ou hatching?

  • Échec d´implantation: FIV répétés avec le transfert embrionnaire mais sans grossesse
  • Femmes dans l´âge avancé
  • Le FSH élevé
  • Les ovocites avec la zone pellucide épaissiée
  • Les embrions d´une morphologie pas bonne
  • Transfert d´embryons congelés

VITRIFICATION

La téchnique de vitrification consiste en congeler les ovocites ou embryons d´une manière instantanée. Les ovocites ou embryons sont refroidis dans les conditions controlées et submergés dans l´azote liquide à basse température (-196ºC) dans un réservoir pour son stockage à long terme. Une fois vitrifiés, les ovocites ou embryons peuvent etre stockés de cette manière pendant plusieurs années avant d´être decongelés et utilisés dans un traitement a posteriori.

Souvent, les traitements de fetilité, comme la fécondation in vitro, ICSI, et le don d´ovocites, générent des embryons surnuméraires. Dans le 50% des cas ces embryons ont la qualité suffisante pour etre congelés et stockés pour son usage futur.

L´emploie d´embryons vitrifiés est beaucoup moins envahissant pour la femme qu´un nouveau cicle de FIV. Au meme temps, avec la congelation d’embryons il est possible de reduire le numéro de naissances multiples et offre aux couples une plus grande flexibilité pour planifier leur famille

Á CERAM avant de vitrifier (congeler) les embryons surnuméraires, nous laissons que ces embryons arrivent au stade de Blastocyste, ce qui nous garantit un pourcentage élevé de survie après la décongelation.

Quand est -elle conseillé la vitrification d´ovocytes ou embrions?

  • Chez les femmes qui ont le risque de developer sindrome d’hyperstimulation ovariene dans le processus de fertilization in vitro (FIV).
  • Quand l´implantation d´embryon peut être menacé comme dans les cas de présence de polypes endometriaux, le développement pas suffisant d´endometrium,
  • Chez les femmes jeunes entre 20 – 30 ans qui souhaitent préserver sa fertilité par décision médicale ou socio – culturelle